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上海通蔚分析如何提高腺病毒細(xì)胞感染能力
更新時(shí)間:2017-08-07   點(diǎn)擊次數(shù):1214次

重要提示
采用EnvirusTM-AdV增強(qiáng)后,感染時(shí)的細(xì)胞融合度對感染效果有影響,建議細(xì)胞融合度在30-50%左右時(shí)進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)。確定了細(xì)胞量以后,建議采用倍比稀釋的方法,用不同量的腺病毒(MOI值:1-1000pfu/cell)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定的腺病毒用量。EnvirusTM-AdV和病毒的稀釋液采用和細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基一致的無血清液體,如無血清DMEM或1640。
 

實(shí)驗(yàn)過程(以24孔板感染為例)
提前一天將細(xì)胞種植在24孔板中,以感染時(shí)細(xì)胞融合度在30-50%左右為宜(懸浮細(xì)胞根據(jù)需要調(diào)整,不要采用過高的細(xì)胞密度)。將4ul的EnvirusTM-AdV用25μl無血清稀釋液稀釋,充分混勻,制成EnvirusTM-AdV稀釋液。4℃靜置5分鐘。將適量病毒原液或稀釋液與EnvirusTM-AdV稀釋液輕柔混勻,4℃靜置15分鐘。
注:如采用病毒原液直接混合出現(xiàn)沉淀,建議用與⑴等量同樣的無血清稀釋液稀釋病毒。
 

將上述混合液加入到含*培養(yǎng)基的細(xì)胞上,37℃培養(yǎng)8小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài),如沒有明顯變化,不要更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。由于腺病毒感染較快,可分別在12,24,48小時(shí)觀察表達(dá)情況。
注:適當(dāng)減少感染時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)基量可以增加感染效率,但也可能增加細(xì)胞毒性。如出現(xiàn)細(xì)胞毒性可增加培養(yǎng)基量或更換培養(yǎng)基。

上海通蔚生物科技有限公司

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